Identificazione del dermatofita in campioni di pelle e di capelli, utilizzando un esame con nested-PCR semplice e affidabile
L'identificazione del dermatofita nella tigna dei capelli (tinea capitis) è essenziale per la scelta del trattamento appropriato e, in diverse tigne, anche per individuare la possibile fonte di infezione. Frequentemente i funghi non riescono a crescere in colture, soprattutto nel caso di una precedente terapia antimicotica.
Obiettivo: Sviluppare un rapido esame di sequenziamento PCR per l'identificazione del dermatofita nella tigna dei capelli (tinea capitis) e del corpo (tinea corporis).
Metodi: È stato estratto il DNA dei funghi da campioni di pelle e di capelli che sono stati trovati positivi all'esame micologico diretto. I dermatofiti sono stati identificati dalla sequenza di DNA ribosomiale della subunità 28S dell'amplicone, generata dalla nested-PCR.
Risultati: La nested-PCR è risultata necessaria per ottenere gli ampliconi in quantità sufficiente per l'identificazione del dermatofita, mediante sequenziamento. I risultati sono in accordo con quelli di una classica identificazione micologica in 14 su 23, 6 su 10, e 19 su 23 casi di tinea capitis, tinea corporis e tinea pedis, rispettivamente, da cui è stato ottenuto un dermatofita in coltura. In 7 casi di 56, è stato identificato un altro dermatofita, rivelando che l'identificazione precedente era errata. Un dermatofita è stato identificato in 12 su 18, 3 su 5, e 4 su 9 casi di tinea capitis, tinea corporis e tinea pedis, rispettivamente, nel caso in cui nessun dermatofita è cresciuto in coltura.
Conclusioni: Anche se lo standard di riferimento per l'identificazione del dermatofita da campioni clinici rimane la coltura fungina, l'analisi sviluppata in questo studio è particolarmente adatta per la tinea capitis. È stato ottenuto un miglioramento della sensibilità per l'identificazione delle specie di dermatofiti, ed è stato possibile identificare il dermatofita anche quando il fungo non riusciva a cresce in colture.
Storia della pubblicazione:
Titolo: Dermatophyte identification in skin and hair samples using a simple and reliable nested-PCR assay
Rivista: British Journal of Dermatology. doi: 10.1111/bjd.12015
Autori: J. Verrier, L. Krähenbühl, O. Bontems, M. Fratti, K. Salamin, M. Monod
Affiliazioni: Department of Dermatology, Centre Hospitalier Universitaire Vaudois, CH-1011 Lausanne, Switzerland
Abstract:
Background: Dermatophyte identification in tinea capitis is essential for choosing the appropriate treatment and in various tinea to identify the possible source of the infection. The failure of fungi to grow in cultures frequently occurs, especially in cases of previous anti-fungal therapy.
Objective: To develop a rapid PCR-sequencing assay for dermatophyte identification in tinea capitis and tinea corporis
Methods: Fungal DNA was extracted from hair and skin samples that were confirmed to be positive by direct mycological examination. Dermatophytes were identified by the sequence of a 28S ribosomal DNA subunit amplicon generated by nested-PCR.
Results: Nested-PCR was found to be necessary to obtain amplicons in substantial amounts for dermatophyte identification by sequencing. The results agreed with those of classical mycological identification in 14 of 23, 6 of 10, and 19 of 23 cases of tinea capitis, tinea corporis and tinea pedis, respectively, from which a dermatophyte was obtained in culture. In 7 of the 56 cases, another dermatophyte was identified, revealing previous misidentification. A dermatophyte was identified in 12 of 18, 3 of 5, and 4 of 9 cases of tinea capitis, tinea corporis and tinea pedis, respectively, in cases in which no dermatophyte grew in culture.
Conclusions: Although the gold standard dermatophyte identification from clinical samples remains fungal cultures, the assay developed in the present study is especially suitable for tinea capitis. Improved sensitivity for the identification of dermatophyte species was obtained as it is possible to identify the dermatophyte when the fungus fails to grow in cultures.
