Apoptosi cellulare indotta dalla terapia fotodinamica con acido 5-aminolevulinico sui fibroblasti che provengono da cicatrici ipertrofiche
Obiettivo: Studiare gli effetti della terapia fotodinamica (PDT) con acido 5-aminolevulinico (ALA) sui fibroblasti dermici provenienti da cicatrici ipertrofiche (HSs).
Metodi: Sono stati prelevati dei campioni di HS da cinque pazienti sottoposti a chirurgia, mentre è stata utilizzata come controllo la pelle normale di donatori sani. I fibroblasti dermici sono stati isolati e coltivati con varie concentrazioni di ALA per 6 ore. È stata misurata la protoporfirina IX (PpIX) intracellulare attraverso la microscopia confocale. Dopo 5 ore di trattamento con ALA, le cellule sono state irradiate con un laser rosso (di lunghezza d'onda di 635 nm) ad una densità di potenza di 10 mW/cm2 e con una densità di energia da 0.5 a 4 J/cm2. Dopo 24 ore è stata misurata la sopravvivenza delle cellule con un kit CCK-8; mentre la morte cellulare è stata rilevata da un dUTP tagliato ed etichettato attraverso la deossinucleotidil- transferasi terminale e l'analisi della citometria a flusso dell'annessina V.
Risultati: Dopo il trattamento con ALA è stato osservato un accumulo intracellulare di PpIX nei fibroblasti sia di pazienti con HS che di donatori sani. Dopo irraggiamento laser, il numero di cellule vitali è diminuito per entrambi i tipi cellulari in relazione alla dose e alla densità di energia. Inoltre, è stata osservata apoptosi con basse dosi di PDT mentre ad alte dosi, sono aumentate le cellule necrotiche.
Conclusione: I fibroblasti derivati dalle HS accumulano efficientemente la PpIX dopo un trattamento con ALA e possono essere eliminati attraverso il processo di apoptosi mediato da un irraggiamento laser controllato.
Storia della pubblicazione:
Titolo: Apoptotic cell death induced by 5-aminolaevulinic acid-mediated photodynamic therapy of hypertrophic scar-derived fibroblasts
Rivista: doi:10.3109/09546634.2012.697987
Autori: Xin Li, Zhao Pin Zhou, Li Hu, Wen Jie Zhang e Wei Li
Affiliazioni:Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Shanghai th People's Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai, China Department of Plastic Surgery, Shanghai Hua Shan Hospital, Shanghai, China
Abstract:
Objective: To investigate the effects of 5-aminolevulinic acid (ALA)-mediated photodynamic therapy (PDT) on dermal fibroblasts from hypertrophic scars (HSs). Methods: HS samples were obtained from five patients who underwent surgery, and normal skin from healthy donors was used as a control. Dermal fibroblasts were isolated and cultured with various concentrations of ALA for 6 h. Intracellular protoporphyrin IX (PpIX) was measured by confocal microscopy. After 5 h of ALA treatment, cells were irradiated by a red laser (635 nm wavelength) at a power density of 10 mW/cm2 with an energy density from 0.5 to 4 J/cm2. Cell survival was measured by a CCK-8 Kit after 24 h. Cell death was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling and flow cytometric analysis of annexin V. Results: Intracellular PpIX accumulation was observed in fibroblasts from HS patients and healthy donors after ALA treatment. After laser irradiation, viable cells were decreased among both cell types in a dose-dependent manner with energy density. In addition, apoptotic cell death was observed with low dose PDT, whereas necrotic cells were increased by high dose PDT. Conclusion: HS-derived fibroblasts efficiently accumulate PpIX after ALA treatment and can be eliminated via apoptosis by controlled laser irradiation.
